电影《731》于 9 月 18 日上映，截至 9 月 19 日 14 时 07 分，实时累计票房达 4.51 亿，其中 9 月 19 日实时累计票房为 1.05 亿。

《731》自预售以来，淘票票、猫眼两大票务网站上超700万的人点击了“想看”，影片上映当日，也打破了中国首映日场次纪录（原纪录保持者《速度与激情9》22.9万场）、国产片首映日场次纪录（原纪录保持者《独行月球》22.3万场）以及过去三年首映日场次纪录（原纪录保持者《独行月球》22.3万场）等3项影史纪录，274149场放映吸引了近千万人次的观众走进影院，回望历史。

观众年龄学历分布

职业分布上，白领/一般职员是主要观影群体，占比65.8%，工人/服务业人员占比22.8%，学生占比8%，公务员占比3.4%。

国内多地影院在排片上也有意增加了“仪式感”，许多影院将当日的首场放映时间定在了上午9点18分，并注有“警钟长鸣”的标识，不少观众冲着这个点买票晒出票根，甚至有人专门把座位选在了9排18号。

影片上映后，关于电影中所传达的历史真相也受到越来越多的关注和讨论。有网友提出，电影中的干净卫生的“住宿条件”堪比宾馆，营养配比丰富的食物是否有违战争年代的常识？另一部分的网友也会热心科普，当时731部队为了用人体做细菌实验，确实会给身为“实验品”的中国人良好的卫生环境和健康保障，但一切最终是为了险恶目的服务。

影片上映首日票房超 3.4 亿，总票房破 4 亿，排片率超 70%，票房收入占全日票房大盘的 97%。此外，《731》上映首日还打破了中国首映日场次纪录、国产片首映日场次纪录以及过去三年首映日场次纪录等多项影史纪录，25.6 万场放映吸引了大量观众。猫眼专业版预测影片票房将超过 15 亿元。